CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419722-ACT

Das Mausgen **Cnr1** kodiert den Cannabinoidrezeptor 1 (CB1/CNR1), einen Gi/o-gekoppelten GPCR, der auf Endocannabinoide wie Anandamid und 2‑Arachidonoylglycerol reagiert und so die synaptische Transmission sowie neuroendokrine Signalwege reguliert. Die Aktivierung von CB1 hemmt typischerweise die Adenylylcyclase und die cAMP/PKA-Signalübertragung, moduliert MAPK/ERK-Wege und steuert die Aktivität von Ionenkanälen, um die Neurotransmitterfreisetzung und die neuronale Erregbarkeit fein abzustimmen. Im ZNS ist CNR1 zentral an neuromodulatorischen Prozessen beteiligt, darunter Belohnung, Nozizeption, Appetit, Stressreaktivität sowie Lernen und Gedächtnis; darüber hinaus hat es zusätzliche Funktionen in peripheren metabolischen und immunbezogenen Signalwegen. Veränderte CNR1-Signalübertragung wird in Mausmodellen häufig im Zusammenhang mit neuropsychiatrischen Phänotypen, schmerzbezogenen Signalwegen und metabolischer Dysregulation untersucht.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Cnr1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Cnr1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Cnr1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Cnr1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CB1/Cannabinoid Receptor 1/CNR1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Cnr1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.