Plásmido CRISPR de Activación (h) BMPR-II: sc-400895-ACT

BMPR2 codifica el receptor de proteína morfogenética ósea tipo II (BMPR‑II), un receptor quinasa de serina/treonina que se une a ligandos BMP y forma complejos heteroméricos con receptores de tipo I para iniciar la señalización canónica SMAD1/5/8, así como vías no canónicas de MAPK y del citoesqueleto. A través de estas cascadas, BMPR‑II regula decisiones del destino celular, incluidas la proliferación, la diferenciación, la migración y la apoptosis, con funciones destacadas en la homeostasis vascular y el patrón del desarrollo. Las alteraciones en la expresión o la señalización de BMPR2 desestabilizan el equilibrio de la red BMP/TGF‑β y se estudian con frecuencia en contextos de disfunción endotelial, remodelado aberrante del músculo liso y defectos congénitos de señalización. Por lo tanto, BMPR‑II es un nodo clave para estudios mecanísticos de programas transcripcionales impulsados por BMP y del “cross-talk” entre vías en células humanas.

BMPR-II El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BMPR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BMPR-II El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BMPR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BMPR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BMPR-II. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BMPR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BMPR-II en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BMPR-II en células tumorales con expresión de BMPR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.