Plásmido Doble Nickase (h) apoL1: sc-403137-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)apoL1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa apoL1 (h) y el plásmido de doble nickasa apoL1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a APOL1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: apoL1 Anticuerpo (A-3): sc-390440
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) apoL1 | sc-403137-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) apoL1 | sc-403137-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
APOL1 codifica la apolipoproteína L1 (apoL1), una proteína de unión a lípidos inducible por interferón, implicada en la defensa inmunitaria innata y en las respuestas celulares al estrés. La apoL1 se localiza en membranas intracelulares y se ha relacionado con la regulación del tráfico vesicular, la autofagia y la homeostasis mitocondrial y lisosomal, con efectos posteriores sobre vías de supervivencia celular. La variación genética en APOL1 se asocia fuertemente con una mayor susceptibilidad a fenotipos de enfermedad renal, lo que ha impulsado estudios mecanísticos en podocitos y otros tipos celulares renales. APOL1 también se investiga en el contexto de las interacciones huésped–patógeno y de redes de señalización inflamatoria que modulan su expresión y función.
apoL1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus APOL1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de APOL1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de APOL1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con APOL1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.