Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419078

Panoramica

Aldh1a1 codifica l’aldeide deidrogenasi 1-A1 (ALDH1A1), un enzima citosolico NAD(P)+-dipendente che ossida un’ampia gamma di aldeidi endogene e xenobiotiche nei corrispondenti acidi carbossilici, supportando così la detossificazione cellulare e l’omeostasi redox. Nei tessuti murini, ALDH1A1 contribuisce al metabolismo dei retinoidi catalizzando la conversione del retinaldeide in acido retinoico, collegando il gene a programmi trascrizionali che influenzano differenziamento, metabolismo e risposte allo stress ossidativo. L’attività di ALDH1A1 si interseca con le vie della perossidazione lipidica e della rimozione delle aldeidi reattive, contribuendo a limitare lo stress carbonilico e la conseguente formazione di addotti su proteine e DNA. Alterazioni dell’espressione o della funzione di ALDH1A1 sono state associate a fenotipi correlati allo stress ossidativo e il gene è spesso studiato in contesti quali disregolazione metabolica, neurobiologia e biologia delle cellule tumorali come marcatore dello stato cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Aldh1a1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Aldh1a1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Aldh1a1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Aldh1a1 per lo studio della segnalazione di Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Aldh1a1 critici per la funzione di Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Aldh1a1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Aldh1a1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Aldh1a1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Aldh1a1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.