ADAM10 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400883-LAC

ADAM10 codifica una metalloproteasi zinco-dipendente ancorata alla membrana (a disintegrin and metalloproteinase 10) che media lo “shedding” dell’ectodominio di numerosi substrati, inclusi recettori e ligandi di Notch, caderine e la proteina precursore dell’amiloide (APP). Attraverso una proteolisi regolata, ADAM10 influenza la segnalazione Notch, il rimodellamento dell’adesione cellula-cellula e la disponibilità di recettori/ligandi sulla superficie cellulare, plasmando processi quali differenziamento, migrazione e segnalazione infiammatoria. Un’attività alterata di ADAM10 è stata collegata a vie rilevanti per la neurobiologia tramite il processamento di APP, nonché a fenotipi associati al cancro attraverso effetti su programmi trascrizionali guidati da Notch e sulla dinamica dell’adesione. Queste caratteristiche rendono ADAM10 un nodo utile per studiare la trasduzione del segnale dipendente da proteasi e le interazioni con il microambiente in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale ADAM10 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ADAM10 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ADAM10 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ADAM10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ADAM10. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ADAM10 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.