Plásmido Doble Nickase (h) ACSL4: sc-401649-NIC

ACSL4 (miembro 4 de la familia de las acil‑CoA sintetasas de cadena larga) es una enzima asociada a la membrana que activa de forma preferente ácidos grasos poliinsaturados, incluido el ácido araquidónico, al convertirlos en tioésteres de acil‑CoA para su incorporación en fosfolípidos. Al modular la remodelación de fosfolípidos y la dinámica de las gotas lipídicas, ACSL4 influye en la disponibilidad de precursores de eicosanoides y en redes más amplias de señalización lipídica. La actividad de ACSL4 está estrechamente vinculada a la biología redox y a la susceptibilidad a la ferroptosis mediante el enriquecimiento de fosfolípidos con PUFA susceptibles de peroxidación, en intersección con vías que controlan el estrés oxidativo y la integridad de la membrana. La alteración de la expresión o la función de ACSL4 se ha asociado con un metabolismo lipídico desregulado y con contextos de biología del cáncer, neurobiología y señalización inflamatoria, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos.

ACSL4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ACSL4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ACSL4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ACSL4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ACSL4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.