YAP Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400040-LAC

Il gene umano **YAP1** codifica YAP, un co-attivatore trascrizionale che funge da principale effettore nucleare della via di segnalazione Hippo, regolando la proliferazione cellulare, la sopravvivenza e il controllo delle dimensioni degli organi. L’attività di YAP è modulata dal sequestro citoplasmatico dipendente dalla fosforilazione e dal trasporto nucleo-citoplasmatico, integrando segnali meccanici, densità cellulare e segnalazione mediata da GPCR per modulare i programmi di espressione genica guidati da TEAD. La deregolazione della segnalazione YAP1/YAP è stata implicata in un controllo alterato della crescita tissutale, nei programmi epitelio-mesenchimali e in cambiamenti delle proprietà simil-staminali, rendendola un nodo ampiamente utilizzato per lo studio delle reti di regolazione della crescita. Nella ricerca biomedica, YAP viene spesso analizzato per il suo ruolo nella meccanotrasduzione, nell’inibizione da contatto e nella riprogrammazione trascrizionale in diversi contesti cellulari.

Le particelle di attivazione lentivirale YAP (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di YAP1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale YAP (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione YAP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di YAP. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo YAP1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.