Plásmido CRISPR de Activación (h) Pax: sc-402171-ACT

PAX2 codifica el factor de transcripción Pax2 con dominio “paired box”, un regulador de unión al ADN dependiente de secuencia esencial para el patrón embrionario y la especificación de linajes, especialmente en el riñón en desarrollo, el tracto urogenital, el ojo y el sistema nervioso central. Pax2 coordina programas génicos que controlan la diferenciación epitelial, la supervivencia celular y la morfogénesis mediante redes transcripcionales que se entrecruzan con vías de señalización del desarrollo como WNT, FGF y NOTCH. La expresión desregulada o las mutaciones en PAX2 se han asociado con anomalías congénitas del riñón y de las vías urinarias y con trastornos del desarrollo ocular, y la actividad alterada de Pax2 también se estudia en contextos de proliferación aberrante y plasticidad de linaje. Como regulador del desarrollo, PAX2 se utiliza ampliamente como marcador y como nodo funcional en modelos de nefrogénesis, sistemas de organoides y estudios de identidad epitelial.

Pax-2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PAX2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Pax-2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PAX2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PAX2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Pax-2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PAX2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Pax-2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Pax-2 en células tumorales con expresión de PAX2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.