Plasmide CRISPR/Cas9 KO MARCKSL1 (h): sc-403985

Présentation

MARCKSL1 (MARCKS-like 1) code une protéine associée à la membrane et se liant à l’actine, qui régule le remodelage du cytosquelette, la forme cellulaire et la motilité grâce à des interactions dépendantes de la phosphorylation avec les phospholipides et le réseau d’actine. Elle intervient dans des processus liés à l’extension des neurites, à la migration cellulaire et à la dynamique d’adhérence, en intégrant des signaux en aval de kinases telles que la PKC et de voies contrôlant la formation des lamellipodes. Une expression altérée de MARCKSL1 a été associée à des modifications du comportement invasif et des programmes de prolifération dans plusieurs contextes tumoraux, et elle est également étudiée en neurobiologie du développement, où la réorganisation de l’actine est cruciale. Ces propriétés font de MARCKSL1 un nœud utile pour analyser les phénotypes cellulaires gouvernés par l’actine et le couplage entre signalisation et cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO MARCKSL1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MARCKSL1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MARCKSL1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MARCKSL1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine MARCKSL1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MARCKSL1 pour l'étude de la signalisation de MARCKSL1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MARCKSL1 essentiels à la fonction de MARCKSL1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MARCKSL1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le MARCKSL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le MARCKSL1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MARCKSL1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le MARCKSL1 plasmide HDR (h) et le MARCKSL1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MARCKSL1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MARCKSL1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.