Plasmide Double Nickase (h) HLA-E: sc-403124-NIC

HLA-E code une molécule de CMH de classe I non classique qui présente un répertoire peptidique restreint, incluant notamment des peptides leaders provenant d’autres protéines HLA de classe I, afin de réguler la surveillance immunitaire. HLA-E exprimée à la surface interagit avec des récepteurs inhibiteurs et activateurs tels que CD94/NKG2A et CD94/NKG2C sur les cellules NK et certains sous-ensembles de lymphocytes T, modulant les réponses cytotoxiques et la tolérance. Par la présentation d’antigènes et une signalisation de type « point de contrôle » immunitaire, HLA-E contribue au contrôle de l’inflammation, aux stratégies d’échappement immunitaire des virus et à la modulation de l’immunogénicité tumorale dans le microenvironnement tumoral. Une expression altérée de HLA-E a été associée à des phénotypes d’échappement immunitaire et à des contextes pathologiques où la reconnaissance par les cellules NK/T est perturbée, ce qui en fait une cible utile pour la recherche en immunologie mécanistique.

HLA-E Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HLA-E dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HLA-E. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HLA-E. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HLA-E.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.