FAS-L Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400562-ACT

FASLG codifica o ligante de Fas (FAS-L), um membro transmembranar do tipo II da superfamília do TNF que se liga ao receptor Fas (CD95) para iniciar a sinalização apoptótica extrínseca. A ligação ao Fas desencadeia o recrutamento de FADD e a ativação da caspase-8, com efeitos a jusante sobre cascatas de caspases, amplificação mitocondrial e homeostase imunitária. O FAS-L é um regulador-chave da morte celular induzida por ativação em células T e contribui para a tolerância periférica e para a função efetora de linfócitos citotóxicos. A desregulação da sinalização FASLG/Fas tem sido associada a patologia mediada pelo sistema imunitário, fenótipos linfoproliferativos e mecanismos de evasão imunitária tumoral, tornando-a relevante para estudos de inflamação, autoimunidade e biologia do cancro.

FAS-L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FASLG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FAS-L O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FASLG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FASLG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FAS-L. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FASLG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FAS-L no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FAS-L em células tumorais com expressão de FASLG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.