EphB1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401429-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- EphB1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- EphB1ダブルニカースプラスミド（h）およびEphB1ダブルニカースプラスミド（h2）は、EPHB1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: EphB1 抗体 (5F10A4): sc-130054
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
EphB1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-401429-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
EphB1 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-401429-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
EPHB1 は、膜結合型の ephrin-B リガンドに結合して細胞接触依存的なシグナル伝達を駆動する、Eph ファミリーの受容体型チロシンキナーゼである EphB1 をコードします。EphB1 は、双方向性シグナル伝達および Rho ファミリー GTPase、MAPK/ERK カスケード、PI3K 関連経路の下流制御を介して、軸索ガイダンス、シナプス構築、細胞移動、境界形成を調節します。上皮および神経系の文脈では、EphB1 依存的なシグナルが接着動態や細胞骨格リモデリングに影響し、組織構築や細胞配置を形作ります。EphB1 シグナルの破綻は発生パターニングの異常と関連づけられており、がん生物学の分野でも、浸潤性、腫瘍微小環境との相互作用、ならびにシグナル経路間クロストークにおける役割が検討されています。
EphB1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における EPHB1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、EPHB1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、EPHB1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、EPHB1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。