Plasmide Double Nickase (h) α_1A-AR: sc-401726-NIC

ADRA1A code le récepteur adrénergique humain alpha1A (α1A-AR), un récepteur couplé aux protéines G (GPCR) qui se couple principalement à Gq/11 pour stimuler la signalisation via la phospholipase C, la mobilisation du Ca2+ dépendante de l’inositol trisphosphate et l’activation de la protéine kinase C. Par ces voies, α1A-AR régule la contraction du muscle lisse, le tonus vasculaire et la neurotransmission, avec des effets en aval sur la signalisation MAPK/ERK et des réponses transcriptionnelles plus larges. L’expression d’ADRA1A et l’équilibre de sa signalisation contribuent au contrôle adrénergique de la physiologie cardiovasculaire et urogénitale, et sa dysrégulation est impliquée dans des affections associées à une altération de la signalisation sympathique et au remodelage tissulaire. En tant que GPCR de surface cellulaire aux sorties de seconds messagers bien caractérisées, il est couramment utilisé pour étudier la désensibilisation des récepteurs, la signalisation biaisée et le dialogue (cross-talk) avec d’autres voies de GPCR et de facteurs de croissance.

α1A-AR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ADRA1A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ADRA1A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ADRA1A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ADRA1A.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.