ZWINT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405718

Übersicht

ZWINT (ZW10-interagierendes Kinetochor-Protein) ist ein konservierter Bestandteil des äußeren Kinetochors, der eine stabile Anheftung von Mikrotubuli und eine korrekte Chromosomentrennung während der Mitose unterstützt. Es interagiert mit dem ZW10/RZZ-Komplex und trägt zur Signalübertragung des Spindelmontage-Checkpoints bei, indem es die Kinetochor-Mikrotubulus-Dynamik mit dem Fortschreiten des Zellzyklus koppelt. Eine veränderte Expression oder Funktion von ZWINT wurde mit chromosomaler Instabilität und proliferativen Phänotypen in verschiedenen Krebsarten in Verbindung gebracht, was es für Studien zu Aneuploidie und Genomstabilität relevant macht. Als mitotischer Regulator wird ZWINT häufig in Signalwegen untersucht, die Checkpoint-Kontrolle, Kinetochor-Architektur und mitotische Stressantworten verknüpfen.

Das ZWINT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ZWINT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ZWINT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ZWINT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZWINT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ZWINT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZWINT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ZWINT-Exone abzielen, die für die ZWINT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ZWINT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZWINT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZWINT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ZWINT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZWINT HDR-Plasmid (h) und ZWINT HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ZWINT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ZWINT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.