ZSWIM8 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-411661

Descripción general

ZSWIM8 (proteína con dedo de zinc tipo SWIM 8) codifica un componente de una ligasa E3 de ubiquitina que actúa como adaptador de sustrato dentro de un complejo de ubiquitinación Cullin-RING, ayudando a controlar el recambio de proteínas en el núcleo y el citoplasma. Una función clave de ZSWIM8 es el control de calidad de los ARN pequeños, donde promueve la degradación de microARN dirigida por el blanco (TDMD) para ajustar la abundancia de miARN y la regulación génica postranscripcional aguas abajo. A través de estos mecanismos, ZSWIM8 influye en vías relacionadas con transiciones del estado celular, programas de desarrollo y redes de transcripción sensibles al estrés. La proteostasis mediada por ubiquitina y la homeostasis de miARN desreguladas, asociadas con una actividad alterada de ZSWIM8, se han investigado en contextos relevantes para la biología del cáncer y fenotipos del neurodesarrollo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ZSWIM8 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ZSWIM8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ZSWIM8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ZSWIM8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ZSWIM8.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ZSWIM8 para la investigación de la señalización de ZSWIM8, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ZSWIM8 críticos para la función de ZSWIM8
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ZSWIM8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ZSWIM8 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ZSWIM8 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ZSWIM8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ZSWIM8 (h) y el plásmido HDR ZSWIM8 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ZSWIM8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ZSWIM8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.