Plásmido CRISPR de Activación (m) ZHX2: sc-436490-ACT

El gen murino **Zhx2** codifica el factor de transcripción **zinc fingers and homeoboxes 2 (ZHX2)**, un regulador predominantemente nuclear que modula programas de expresión génica que controlan la diferenciación celular, la proliferación y la homeostasis metabólica. ZHX2 funciona dentro de redes de represión/activación transcripcional a través de dominios de dedos de zinc y homeobox de unión al ADN, configurando estados transcripcionales específicos de cada tejido. En sistemas murinos, la actividad alterada de Zhx2 se ha vinculado con desregulación de la expresión génica hepática, fenotipos del desarrollo y efectos dependientes del contexto sobre la señalización oncogénica y programas supresores tumorales. Estas propiedades convierten a ZHX2 en un nodo útil para analizar el control transcripcional de la identidad de linaje y los circuitos reguladores de genes asociados a enfermedades.

ZHX2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Zhx2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZHX2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Zhx2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Zhx2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZHX2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Zhx2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZHX2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZHX2 en células tumorales con expresión de Zhx2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.