Plásmido CRISPR de Activación (h) ZBP1: sc-406434-ACT

ZBP1 (proteína 1 de unión a ADN-Z; también conocida como DAI) es un sensor de la inmunidad innata que reconoce ácidos nucleicos en conformación Z y acopla señales asociadas a patógenos o a daño con respuestas antivirales e inflamatorias. Tras su activación, ZBP1 establece interacciones dependientes de RHIM con RIPK3 y puede iniciar programas de muerte celular regulada, incluida la necroptosis, además de converger con redes transcripcionales impulsadas por interferón. Este eje de señalización se integra con las vías de los receptores de reconocimiento de patrones y modula la producción de citocinas y las decisiones sobre el destino celular en respuesta a la infección viral y al estrés celular. La actividad desregulada de ZBP1 se ha vinculado con una señalización de interferón aberrante, patología inflamatoria e interacciones virus–huésped relevantes para la investigación en inmunología y muerte celular.

ZBP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZBP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZBP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZBP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZBP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZBP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZBP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZBP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZBP1 en células tumorales con expresión de ZBP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.