YB-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401385-ACT

YBX1 kodiert das menschliche Y-Box-bindende Protein 1 (YB-1), einen multifunktionalen DNA/RNA-bindenden Faktor, der Transkription, mRNA-Spleißen, Translation und die Dynamik von Stressgranula reguliert. YB-1 ist an zellulären Stressantworten beteiligt und beeinflusst über eine weitreichende Kontrolle von Genexpressionsprogrammen die Zellzyklussteuerung, Apoptose und DNA-Schadenssignalwege. Es wurde mit Signalwegen in Verbindung gebracht, die Proliferation und inflammatorische Signalgebung steuern, einschließlich der Modulation onkogener transkriptioneller Netzwerke sowie der posttranskriptionellen Regulation wachstumsrelevanter Transkripte. Eine dysregulierte YBX1/YB-1-Aktivität ist häufig mit Tumorbiologie, metastaseassoziierten Phänotypen und einer erhöhten Resistenz gegenüber zellulärem Stress verbunden und stellt damit ein wichtiges Ziel für mechanistische Studien zur Genregulation und Proteostase dar.

YB-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen YBX1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

YB-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des YBX1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der YBX1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen YB-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native YBX1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von YB-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des YB-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem YBX1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.