Particules Lentivirales d'Activation (m) XBP1: sc-423727-LAC

Xbp1 code pour XBP1, un facteur de transcription à leucine zipper basique (bZIP) qui constitue un effecteur central de la réponse aux protéines mal repliées (UPR) lors du stress du réticulum endoplasmique (RE). Après épissage médié par IRE1, XBP1 actif met en place des réseaux transcriptionnels qui augmentent la capacité de repliement du RE, régulent la dégradation associée au RE (ERAD) et remodèlent la voie sécrétoire ainsi que les processus de biosynthèse des lipides. Dans les systèmes murins, l’activité de XBP1 façonne la différenciation et la fonction de types cellulaires hautement sécréteurs et intègre des signaux métaboliques et inflammatoires via les voies de stress du RE. Une signalisation XBP1 dérégulée est largement utilisée comme point d’entrée mécanistique pour étudier les déséquilibres de la protéostasie, l’adaptation des cellules immunitaires et des modèles de pathologies liées au stress.

Les particules d'activation lentivirales XBP1 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Xbp1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales XBP1 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Xbp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de XBP1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Xbp1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.