XBP1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400131-NIC

XBP1（X-box binding protein 1）は、塩基性ロイシンジッパー（bZIP）型の転写因子であり、特にIRE1による非典型的スプライシングを介したERストレスシグナル伝達の下流において、アンフォールデッド・プロテイン・レスポンス（UPR）の中核的な実行因子として機能します。スプライシングされたXBP1アイソフォームは、ER容量を拡大し、タンパク質のフォールディングと分泌を促進するとともに、プロテオスタシスを脂質代謝や細胞分化と協調させる転写プログラムを駆動します。XBP1活性は、免疫系および内分泌系の分泌細胞機能と密接に関連しており、ストレス下での炎症シグナル伝達や代謝適応にも影響を及ぼします。XBP1依存経路の制御異常は、がん生物学、代謝疾患の発症機構、免疫介在性疾患など、慢性的なERストレスを伴う病態と関連づけられており、ストレス適応回路を研究するうえで広く用いられる重要なノードとなっています。

XBP1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における XBP1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、XBP1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、XBP1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、XBP1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。