Wnt-2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402665-ACT

WNT2 umano codifica Wnt-2, un ligando glicoproteico secreto che attiva la segnalazione Wnt per regolare lo sviluppo embrionale, il patterning dei tessuti e la comunicazione stromale–epiteliale nell’adulto. Wnt-2 interagisce principalmente con i recettori Frizzled e i co-recettori LRP5/6 per promuovere la stabilizzazione della β-catenina e programmi trascrizionali che controllano proliferazione, differenziamento e decisioni di destino cellulare. Si interfaccia inoltre con vie Wnt non canoniche che, in modo dipendente dal contesto, influenzano la dinamica del citoscheletro e la migrazione. Un’espressione deregolata di WNT2 e un’attività alterata della via sono state associate a modifiche della morfogenesi e a cambiamenti della segnalazione del microambiente rilevanti per processi oncogenici e per il rimodellamento fibrotico, a supporto del suo studio come nodo di via in modelli pertinenti alla malattia.

Wnt-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di WNT2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Wnt-2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus WNT2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione WNT2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Wnt-2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus WNT2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Wnt-2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Wnt-2 nelle cellule tumorali con espressione di WNT2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.