Plasmide Double Nickase (h) VRL-1: sc-401648-NIC

Le TRPV2 humain code le canal VRL-1, apparenté aux récepteurs vanilloïdes : il s’agit d’un canal ionique TRP non sélectif, perméable au Ca2+, qui intègre des signaux mécaniques, la chaleur et la signalisation lipidique afin de moduler l’excitabilité membranaire et la dynamique du calcium intracellulaire. L’activité de VRL-1 influence des voies dépendantes du calcium liées au remodelage du cytosquelette, au trafic vésiculaire, ainsi qu’à des cascades de signalisation en aval associées aux voies MAPK et PI3K, qui coordonnent la migration cellulaire, la différenciation et les réponses au stress. Ce canal est particulièrement étudié dans les cellules immunitaires et neuronales, où l’influx de Ca2+ déclenché par des stimuli peut moduler des programmes inflammatoires et la signalisation sensorielle. Des altérations de l’expression de TRPV2 ou de la fonction du canal ont été associées à des phénotypes pertinents pour diverses pathologies en biologie du cancer, dans les réponses au stress des cardiomyocytes et dans des processus neuro-inflammatoires, ce qui en fait une cible mécanistique pour des recherches centrées sur les voies de signalisation.

VRL-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TRPV2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TRPV2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TRPV2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TRPV2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.