Plasmide CRISPR/Cas9 KO VMP1 (h): sc-405940

Présentation

VMP1 (vacuole membrane protein 1) est une protéine membranaire intégrale requise pour de multiples événements de remodelage membranaire, en particulier l’initiation et la progression de l’autophagie. Elle participe à la formation du phagophore via des interactions avec la machinerie d’autophagie, soutient la biogenèse des autophagosomes et a été impliquée dans la dynamique des sites de contact entre le réticulum endoplasmique et d’autres organites, qui coordonnent le transfert de lipides et l’homéostasie des organites. Au-delà de l’autophagie, VMP1 contribue au trafic vésiculaire et à l’adaptation au stress cellulaire, des processus fréquemment perturbés dans le cancer, les maladies neurodégénératives et les contextes inflammatoires, où une protéostasie altérée et le renouvellement des organites sont des caractéristiques marquantes.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VMP1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VMP1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VMP1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VMP1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VMP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VMP1 pour l'étude de la signalisation de VMP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VMP1 essentiels à la fonction de VMP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VMP1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VMP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le VMP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VMP1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VMP1 plasmide HDR (h) et le VMP1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VMP1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VMP1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.