VMAT 2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401308-LAC

SLC18A2 kodiert den vesikulären Monoamintransporter 2 (VMAT2), ein integrales Membranprotein synaptischer Vesikel, das den elektrochemischen Protonengradienten nutzt, um Dopamin, Serotonin, Noradrenalin, Adrenalin und Histamin in sekretorische Vesikel zu transportieren. Durch die Regulation der vesikulären Sequestrierung und der quantalen Freisetzung steuert VMAT2 die monoaminerge Neurotransmission und schützt Zellen vor der Oxidation zytosolischer Monoamine. Damit ist es mit Vesikeltransport, Neurotransmitterstoffwechsel und Signalwegen des oxidativen Stresses verknüpft. Eine veränderte Expression oder Funktion von SLC18A2 wurde mit einer erhöhten Vulnerabilität dopaminerger Neurone und neuropsychiatrischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was das Gen für Studien zu Mechanismen der Parkinson-Krankheit, zur Stimmungsregulation und zur Biologie von Substanzkonsum relevant macht. Humanes VMAT2 wird zudem als Marker und funktioneller Knotenpunkt in Modellen der katecholaminergen und serotonergen Differenzierung sowie der Dynamik synaptischer Vesikel verwendet.

VMAT 2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SLC18A2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

VMAT 2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SLC18A2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen VMAT 2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SLC18A2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.