Plásmido Doble Nickase (h) Villin: sc-400587-NIC

VIL1 codifica la villina, una proteína de unión a la actina regulada por Ca²⁺, enriquecida en el intestino y en otras células epiteliales, donde agrupa, tapa y secciona la F-actina para sostener el ensamblaje de las microvellosidades y la arquitectura del borde en cepillo. Mediante la remodelación dinámica del citoesqueleto apical, la villina contribuye a la polaridad epitelial, la función de barrera y procesos vinculados a la migración celular y la restitución de heridas. La expresión alterada de VIL1 se utiliza ampliamente como marcador de diferenciación epitelial, y la desregulación de los programas citoesqueléticos asociados a la villina se ha estudiado en contextos de lesión epitelial, inflamación y biología tumoral. Como andamiaje para la dinámica de la actina, la villina conecta la señalización del calcio y la regulación dependiente de fosfoinosítidos con el mantenimiento estructural de la superficie apical.

Villin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus VIL1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de VIL1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de VIL1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con VIL1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.