Villin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400587

Übersicht

VIL1 kodiert Villin, ein epithelzellspezifisches aktinbindendes Protein, das im Bürstensaum (Brush Border) von Darmepithelzellen und proximalen Tubuluszellen der Niere angereichert ist. Dort bündelt, kappt und severiert es F‑Aktin und trägt so zur Ausbildung der Mikrovilli-Architektur bei. Über eine durch Ca2+ und Phosphoinositide regulierte Aktin-Remodellierung unterstützt Villin die epitheliale Polarität, den Membrantransport an der apikalen Oberfläche sowie die Barrierefunktion während Differenzierung und Regeneration. VIL1 wird широко als Marker der Enterozyten-Linie und der epithelialen Reifung verwendet; zudem werden veränderte Villin-Expression oder -Lokalisation bei gastrointestinalen Schädigungen und in entzündlichen Kontexten sowie in der Biologie epithelialer Tumoren beschrieben. Diese Eigenschaften machen VIL1 zu einem praktischen Ansatzpunkt für die Untersuchung der Zytoskelettdynamik, der epithelialen Morphogenese und der Aufrechterhaltung von Mikrovilli.

Das Villin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VIL1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VIL1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VIL1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Villin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VIL1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Villin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VIL1-Exone abzielen, die für die Villin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VIL1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Villin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Villin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VIL1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Villin HDR-Plasmid (h) und Villin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VIL1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VIL1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.