Villin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400587

概要

VIL1はビリン（villin）をコードする遺伝子であり、腸管上皮細胞や腎近位尿細管細胞の刷子縁に豊富に存在する上皮特異的なアクチン結合タンパク質です。ビリンはF-アクチンを束ね（bundling）、キャップし（capping）、切断する（severing）ことで微絨毛の構築を制御し、その形態形成に寄与します。Ca2+およびホスホイノシチドにより制御されるアクチン再編成を介して、ビリンは上皮の極性、頂端膜での膜輸送、分化・再生過程におけるバリア機能を支えます。VIL1は腸上皮細胞（enterocyte）系列および上皮成熟のマーカーとして広く用いられており、消化管の傷害や炎症状況、さらには上皮性腫瘍の生物学において、ビリンの発現量や局在の変化が報告されています。これらの特性により、VIL1は細胞骨格ダイナミクス、上皮形態形成、微絨毛維持を研究するうえで実用的な標的（ノード）となります。

Villin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVIL1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VIL1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VIL1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Villinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Villinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VIL1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Villinの機能に不可欠なVIL1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VIL1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Villin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびVillin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VIL1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Villin HDRプラスミド（h）および Villin HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVIL1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVIL1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。