VILIP-1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401100-ACT

VSNL1 codifica a proteína 1 semelhante à visinina (VILIP-1), um sensor neuronal de cálcio da família EF-hand que sofre alterações conformacionais dependentes de Ca2+ para regular a sinalização nas membranas. A VILIP-1 participa da modulação da atividade sináptica e da excitabilidade neuronal acoplada ao Ca2+, influenciando vias de segundos mensageiros e programas transcricionais a jusante importantes para a neuroplasticidade. Alterações na expressão de VSNL1/VILIP-1 e na dinâmica da sinalização de cálcio têm sido associadas a processos relevantes para doenças neurodegenerativas e neuropsiquiátricas, incluindo respostas neuronais ao estresse e disfunção sináptica. Assim, o VSNL1 é frequentemente estudado em modelos de diferenciação neuronal, sinalização dependente de atividade e fenótipos moleculares ligados a biomarcadores.

VILIP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de VSNL1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VILIP-1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus VSNL1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição VSNL1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VILIP-1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus VSNL1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VILIP-1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VILIP-1 em células tumorais com expressão de VSNL1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.