Vigilin Plasmide Double Nickase (h): sc-404125-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Vigilin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Vigilin Double Nickase Plasmid (h) e il Vigilin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HDLBP. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Vigilin Antibody (H-3): sc-271523
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Vigilin Plasmide Double Nickase (h) | sc-404125-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Vigilin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-404125-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HDLBP umano codifica Vigilin, una proteina multifunzionale legante l’RNA contenente molteplici domini KH, che si associa a complessi mRNP per regolare la stabilità dell’mRNA, la localizzazione subcellulare e la traduzione. Vigilin partecipa a programmi di controllo post-trascrizionale collegati all’omeostasi di lipidi e lipoproteine, inclusa la regolazione di trascritti coinvolti nella gestione del colesterolo e nelle risposte allo stress metabolico. Grazie all’accoppiamento tra metabolismo dell’RNA e vie cellulari di crescita e adattamento, l’alterazione dell’attività di HDLBP/Vigilin è stata esaminata in contesti quali il metabolismo disregolato e modelli di malattie proliferative, in cui le reti di regolazione dell’RNA risultano perturbate. Queste proprietà rendono Vigilin un bersaglio utile per analizzare meccanismi incentrati sull’RNA che plasmano gli esiti dell’espressione genica nelle cellule umane.
Vigilin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HDLBP nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HDLBP. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HDLBP. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HDLBP interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.