VHR Plasmide Double Nickase (h): sc-405733-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- VHR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il VHR Double Nickase Plasmid (h) e il VHR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DUSP3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: VHR Antibody (F-2): sc-374161
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
VHR Plasmide Double Nickase (h) | sc-405733-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
VHR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405733-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La fosfatasi a doppia specificità 3 (DUSP3), nota anche come fosfatasi correlata a vaccinia H1 (VHR), è una fosfatasi citosolica a doppia specificità che defosforila residui di fosfotirosina e fosfoserina/treonina sulle MAPK, con attività riportata nei confronti di membri delle famiglie ERK e JNK. Modulando l’ampiezza e la durata della segnalazione MAPK, VHR contribuisce al controllo della progressione del ciclo cellulare, della segnalazione di risposta allo stress e dei programmi trascrizionali a valle degli input di fattori di crescita e citochine. DUSP3 è stata inoltre collegata alla regolazione della segnalazione immunitaria e della proliferazione cellulare attraverso i suoi effetti sugli stati di fosforilazione delle chinasi e sull’espressione genica a valle. Un’alterazione dell’espressione o dell’attività di DUSP3/VHR è stata descritta in contesti di segnalazione oncogenica e nella biologia di tumori ematologici o solidi, incentivando studi meccanicistici del rimodellamento delle vie di segnalazione in modelli rilevanti per la malattia.
VHR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DUSP3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DUSP3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DUSP3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DUSP3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.