Plasmide Double Nickase (h) VHR: sc-405733-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) VHR correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide VHR Double Nickase (h) et le plasmide VHR Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DUSP3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: VHR Antibody (F-2): sc-374161
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) VHR | sc-405733-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) VHR | sc-405733-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La phosphatase à double spécificité 3 (DUSP3), également appelée phosphatase apparentée à la H1 du virus vaccinia (VHR), est une phosphatase cytosolique à double spécificité qui déphosphoryle des résidus phosphotyrosine et phosphosérine/phosphothréonine sur les MAPK, avec une activité rapportée envers des membres des familles ERK et JNK. En modulant l’amplitude et la durée de la signalisation MAPK, VHR contribue au contrôle de la progression du cycle cellulaire, des voies de réponse au stress et des programmes transcriptionnels en aval des signaux induits par les facteurs de croissance et les cytokines. DUSP3 a également été associée à la régulation de la signalisation immunitaire et de la prolifération cellulaire via ses effets sur l’état de phosphorylation des kinases et l’expression génique en aval. Une expression ou une activité altérée de DUSP3/VHR a été décrite dans des contextes de signalisation oncogénique ainsi que dans la biologie des tumeurs hématologiques ou solides, ce qui motive des études mécanistiques du recâblage des voies dans des modèles pertinents pour la maladie.
VHR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DUSP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DUSP3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DUSP3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DUSP3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.