VHR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405733

Übersicht

Dual-Spezifitäts-Proteinphosphatase 3 (DUSP3), auch bekannt als VHR, ist eine atypische Dual-Spezifitätsphosphatase, die Phosphotyrosin- sowie Phosphoserin/-threonin-Reste an MAP-Kinasen dephosphoryliert. VHR moduliert die Dynamik der MAPK/ERK-Signalübertragung und trägt zur Kontrolle des Zellzyklusfortschritts, von Stressantworten und der Signalabschaltung nach Wachstumsfaktor- und immunbezogenen Reizen bei. Durch die Feinabstimmung phosphorylierungsabhängiger Transkriptionsprogramme beeinflusst DUSP3 Proliferations- und Differenzierungsphänotypen in humanen Zellen. Eine dysregulierte Phosphataseaktivität und eine veränderte Kontrolle des MAPK-Signalwegs sind häufig an Krebsbiologie und inflammatorischer Signalübertragung beteiligt, wodurch DUSP3 einen nützlichen Ansatzpunkt für mechanistische Studien der Phosphoregulation darstellt.

Das VHR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DUSP3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DUSP3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DUSP3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VHR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DUSP3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VHR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DUSP3-Exone abzielen, die für die VHR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DUSP3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VHR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom VHR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DUSP3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VHR HDR-Plasmid (h) und VHR HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DUSP3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DUSP3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.