versican Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401173-NIC

O VCAN humano codifica a versicana, um grande proteoglicano de sulfato de condroitina da matriz extracelular que molda a arquitetura pericelular e regula a adesão, a migração e a proliferação celular por meio de interações com o hialuronano, integrinas e a sinalização de fatores de crescimento. A versicana contribui para a morfogênese tecidual e o reparo de feridas e modula a mecanotransdução e o tráfego de células inflamatórias em microambientes estromais e vasculares. Alterações na expressão de VCAN ou no equilíbrio de suas isoformas têm sido associadas a programas de remodelamento da matriz extracelular implicados em fibrose, aterosclerose e estroma associado a tumores, onde pode influenciar a invasão e a infiltração imune. Essas características tornam o VCAN um alvo útil para estudar sinalização dirigida pela matriz, dinâmicas epitélio–mesênquima e a comunicação célula–matriz em sistemas modelo humanos.

versican O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus VCAN em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de VCAN. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função VCAN. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com VCAN interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.