VDUP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425098

Übersicht

Txnip kodiert das Thioredoxin-interagierende Protein (VDUP1), einen redoxregulatorischen Faktor, der an Thioredoxin bindet und es hemmt und dadurch zelluläre Antworten auf oxidativen Stress sowie redoxsensitives Signaling mitprägt. In Mauszellen beeinflusst VDUP1 den Glukose- und Lipidstoffwechsel, die mitochondriale Funktion und Entzündungsprogramme; zudem wurden Zusammenhänge mit der AMPK/mTOR-Signalgebung und eine Modulation der NLRP3-Inflammasom-Aktivität beschrieben. Eine veränderte Txnip-Expression wurde mit Phänotypen metabolischen Stresses und fehlregulierter Immun-Signalgebung in Verbindung gebracht, was Txnip zu einem nützlichen Knotenpunkt macht, um zu untersuchen, wie Redoxkontrolle mit Nährstoffsensorik und Zytokinwegen zusammenspielt. Da Txnip auf transkriptioneller Ebene auf Glukose-, ER-Stress- und oxidative Signale reagiert, wird es häufig in Modellen metabolischer Dysfunktion und entzündungsbedingter Gewebeschädigung untersucht.

Das VDUP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Txnip-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Txnip-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Txnip nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VDUP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Txnip-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VDUP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Txnip-Exone abzielen, die für die VDUP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Txnip-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VDUP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom VDUP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Txnip-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VDUP1 HDR-Plasmid (m) und VDUP1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Txnip-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Txnip-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.