VDUP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425098-ACT

Txnip codifica a VDUP1 (proteína de interação com tiorredoxina), um regulador sensível ao estado redox que se liga à tiorredoxina para modular as respostas celulares ao estresse oxidativo e a homeostase de tióis. Em células de camundongo, a VDUP1 conecta sinais metabólicos a programas de sinalização que incluem a detecção de energia relacionada à AMPK, a utilização de glicose e respostas transcricionais inflamatórias, influenciando a apoptose, a autofagia e o controle do ciclo celular. A expressão de Txnip responde ao estresse nutricional e às EROs (espécies reativas de oxigênio), posicionando-o na interseção entre a função mitocondrial e vias adaptativas ao estresse. A atividade desregulada de TXNIP/VDUP1 tem sido associada a mecanismos de doenças metabólicas e inflamatórias, tornando-o um ponto útil para investigar o acoplamento redox-metabólico em pesquisa biomédica.

VDUP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Txnip sem alterar a sequência de ADN subjacente.

VDUP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Txnip em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Txnip, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de VDUP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Txnip nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de VDUP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via VDUP1 em células tumorais com expressão de Txnip silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.