Partículas Lentivirales de Activación (h) V-ATPase G1: sc-406125-LAC

ATP6V1G1 codifica la subunidad G1 del dominio V1 de la H+-ATPasa vacuolar (V-ATPasa), una bomba de protones multisubunidad que impulsa la acidificación dependiente de ATP de endosomas, lisosomas y vesículas secretoras. Al regular el pH luminal, la actividad de la V-ATPasa sostiene la endocitosis mediada por receptores, el tráfico vesicular, el flujo autofágico y la activación de enzimas lisosomales, y contribuye a la homeostasis del pH celular. La alteración de la composición o la actividad de las subunidades de la V-ATPasa se asocia con cambios en la detección de nutrientes y la señalización vinculada a mTOR, defectos en el recambio proteico y respuestas al estrés. La acidificación organelar desregulada y la disfunción endolisosomal son características recurrentes en la biología del cáncer y en la investigación de la neurodegeneración, lo que convierte a ATP6V1G1 en una diana útil para estudios mecanísticos de la biología de las vesículas.

Las partículas de activación lentiviral V-ATPase G1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ATP6V1G1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral V-ATPase G1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ATP6V1G1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de V-ATPase G1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ATP6V1G1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.