USF-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423629

Übersicht

Der Upstream-Transkriptionsfaktor 2 (USF-2), kodiert durch das Mausgen *Usf2*, ist ein basischer Helix-Loop-Helix-Leucin-Zipper-Transkriptionsfaktor, der an E-Box-Motive bindet und dadurch die Promotoraktivität in Netzwerken metabolischer und stressresponsiver Gene reguliert. USF-2 ist an der transkriptionellen Kontrolle des Glukose- und Lipidstoffwechsels, der Zellzyklusprogression sowie von Differenzierungsprogrammen beteiligt und kann über Interaktionen mit Koregulatoren auch den Chromatinkontext modulieren. In murinen Systemen wurde eine veränderte USF-2-Aktivität mit einer gestörten metabolischen Homöostase und Veränderungen in proliferativen Signalwegen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für Studien zu kardiometabolischen und krebsassoziierten Signalwegen unterstreicht. *Usf2* wird daher häufig als Knotenpunkt untersucht, der Nährstoffsensorik, transkriptionelle Schaltkreise und gewebespezifische Genexpression verbindet.

Das USF-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Usf2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Usf2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Usf2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die USF-2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Usf2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der USF-2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Usf2-Exone abzielen, die für die USF-2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Usf2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom USF-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom USF-2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Usf2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das USF-2 HDR-Plasmid (m) und USF-2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Usf2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Usf2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.