UNC5H3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403782-ACT

UNC5C kodiert den menschlichen Netrin-Rezeptor UNC5H3, einen Abhängigkeitsrezeptor, der chemorepulsive Leitsignale vermittelt und zur Axonführung, neuronalen Migration und Synapsenorganisation beiträgt. Durch die Bindung von Netrin-1 und nachgeschaltete Signalwege beeinflusst UNC5H3 die Zytoskelettdynamik, Zelladhäsion und die Anfälligkeit für Apoptose und integriert dabei Signale aus Pfaden, die die Gewebearchitektur und die Ausbildung neuronaler Schaltkreise formen. Veränderte UNC5C-Aktivität und -Expression wurden mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen sowie mit fehlregulierten Programmen der Zellmotilität in Verbindung gebracht, die in der Krebsbiologie und im Kontext neurodegenerativer Erkrankungen eine Rolle spielen. Als Leitungsrezeptor an der Zelloberfläche ist UNC5H3 zudem relevant für die Untersuchung von Rezeptor-Trafficking, ligandenabhängiger Signalübertragung und kontextabhängiger Überlebenssignalgebung.

UNC5H3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen UNC5C-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

UNC5H3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des UNC5C-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der UNC5C-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen UNC5H3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native UNC5C-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von UNC5H3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des UNC5H3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem UNC5C-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.