UNC45A Lentiviral Activation Particles (m): sc-430401-LAC

Unc45a kodiert für UNC45A, ein Myosin-Chaperon mit UCS-Domäne, das mit HSP90 zusammenwirkt, um die korrekte Faltung, Stabilisierung und den funktionellen Zyklus nichtmuskulärer Myosine zu fördern. Durch die Regulation der Aktomyosin-Dynamik unterstützt UNC45A die Organisation des Zytoskeletts, den Vesikeltransport und die Zellmigration und ist damit mit Prozessen wie der Zytokinese und der epithelialen Polarität verknüpft. Eine veränderte UNC45A-Aktivität kann die Proteostase und kontraktilitätsabhängige Signalwege stören, mit nachgeschalteten Auswirkungen auf die Gewebehomöostase und Stressantworten. Diese Funktionen machen das murine UNC45A zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zytoskelettassoziierter Phänotypen und von Gennetzwerken, die proliferatives und migratorisches Verhalten beeinflussen.

UNC45A Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Unc45a-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

UNC45A Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Unc45a-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen UNC45A-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Unc45a-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.