Particules Lentivirales d'Activation (h) UHRF1: sc-403851-LAC

UHRF1 (ubiquitin-like with domaines PHD et RING finger 1) est un régulateur de la chromatine à domaines multiples qui coordonne la méthylation d’entretien de l’ADN avec la reconnaissance des modifications d’histones durant la phase S. En se liant aux sites CpG hémiméthylés et en interagissant avec DNMT1, UHRF1 favorise la propagation des marques épigénétiques, influençant la progression du cycle cellulaire, l’assemblage de la chromatine couplé à la réplication et la stabilité du génome. Le recrutement, médié par UHRF1, de l’activité de ligase ubiquitine ainsi que de lecteurs d’histones relie la méthylation de l’ADN, la méthylation de H3K9 et l’organisation de l’hétérochromatine, façonnant les programmes transcriptionnels. Une expression dérégulée d’UHRF1 est fréquemment associée à des états épigénétiques altérés observés dans des phénotypes cellulaires prolifératifs et transformés, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la dérégulation épigénétique en biologie du cancer et du contrôle des gènes du développement.

Les particules d'activation lentivirales UHRF1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de UHRF1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales UHRF1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription UHRF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de UHRF1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif UHRF1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.