Plásmido Doble Nickase (m) UHRF1: sc-421937-NIC

Uhrf1 codifica UHRF1, un regulador epigenético multidominio que acopla el reconocimiento del ADN CpG hemimetilado con el reclutamiento de la maquinaria de metilación de mantenimiento del ADN durante la fase S. A través de sus dominios SRA, PHD y RING, UHRF1 coordina la herencia de la metilación del ADN, el diálogo cruzado entre modificaciones de histonas y la remodelación de la cromatina para preservar la estabilidad del genoma y los programas transcripcionales. En células de ratón, la actividad de UHRF1 está estrechamente vinculada a la progresión del ciclo celular, el ensamblaje de cromatina acoplado a la replicación y la represión de elementos transponibles, con efectos posteriores sobre la diferenciación y el compromiso de linaje. El mantenimiento epigenético asociado a UHRF1, cuando se desregula, es ampliamente relevante para la transformación oncogénica, la proliferación aberrante y la inestabilidad del epigenoma, lo que convierte a Uhrf1 en un nodo clave para estudios mecanísticos de la regulación génica impulsada por la metilación.

UHRF1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Uhrf1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Uhrf1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Uhrf1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Uhrf1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.