Plásmido Doble Nickase (h) UHRF1: sc-403851-NIC

UHRF1 (ubiquitin-like con dominios PHD y RING finger 1) es un regulador epigenético multidominio que coordina el mantenimiento de la metilación del ADN y la herencia del estado de la cromatina durante la fase S. Al reconocer sitios CpG hemimetilados y marcas de la histona H3, UHRF1 recluta y estimula a DNMT1 y se acopla a la maquinaria de ubiquitinación y desacetilación de histonas para preservar los programas transcripcionales. Su actividad favorece la progresión del ciclo celular, el ensamblaje de cromatina acoplado a la replicación y la estabilidad del genoma mediante la regulación de la organización de la heterocromatina y de las respuestas al daño del ADN. La expresión desregulada de UHRF1 y los patrones de metilación alterados dependientes de UHRF1 se asocian con frecuencia con el silenciamiento aberrante de vías supresoras de tumores y con una remodelación epigenómica más amplia en la biología del cáncer.

UHRF1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus UHRF1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de UHRF1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de UHRF1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con UHRF1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.