Plasmide CRISPR/Cas9 KO UBF (h): sc-400521

Présentation

UBTF code le facteur de transcription de liaison en amont (UBF), une protéine de liaison à l’ADN de type « high-mobility group » (HMG box) essentielle à la transcription de l’ADN ribosomique dépendante de l’ARN polymérase I. UBF contribue à organiser la chromatine rDNA, favorise la formation du complexe de pré‑initiation de la Pol I et soutient la structure nucléolaire ainsi que la biogenèse des ribosomes, ce qui le relie au contrôle de la croissance cellulaire et à la protéostasie. Par son rôle dans la signalisation du stress nucléolaire et sa coordination avec les voies du cycle cellulaire et de la réponse aux dommages de l’ADN, une activité UBTF/UBF altérée peut influencer la prolifération et la stabilité du génome. La dérégulation de la transcription par la Pol I et de la fonction nucléolaire est une caractéristique récurrente de la biologie des cancers et a également été impliquée dans des contextes de maladies neurodéveloppementales et neurodégénératives.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UBF (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UBTF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UBTF, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UBTF à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UBF.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UBTF pour l'étude de la signalisation de UBF, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UBTF essentiels à la fonction de UBF
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UBTF pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UBF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le UBF plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UBTF. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UBF plasmide HDR (h) et le UBF (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UBTF pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UBTF définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.