UBE2O Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-410610

Panoramica

UBE2O codifica un enzima coniugante dell’ubiquitina ibrido E2/E3 che media il trasferimento di ubiquitina alle proteine substrato, collegando l’ubiquitinazione alla proteostasi e al controllo di qualità delle proteine. Partecipa alla regolazione di vie associate alla traduzione, al rimodellamento dei complessi proteici in risposta allo stress e alle transizioni dello stato cellulare, indirizzando proteine selezionate verso una degradazione dipendente dall’ubiquitina. Grazie alla sua influenza sulla segnalazione ubiquitinica e sulla stabilità di regolatori chiave, UBE2O è stato studiato in contesti che includono alterazioni dell’omeostasi del proteoma, adattamento metabolico e programmi legati al ciclo cellulare o alla differenziazione. L’attività disregolata di UBE2O e le dinamiche di ubiquitinazione sono spesso oggetto di studio nel cancro e in altre malattie caratterizzate da degrado proteico e risposte allo stress compromessi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2O (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UBE2O in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UBE2O insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UBE2O a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UBE2O.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UBE2O per lo studio della segnalazione di UBE2O, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UBE2O critici per la funzione di UBE2O
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UBE2O per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UBE2O CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal UBE2O CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UBE2O. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UBE2O Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR UBE2O (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UBE2O per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UBE2O definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.