UBE2G2 Double Nickase Plasmid (h): sc-404851-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das UBE2G2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- UBE2G2 Double-Nickase-Plasmid (h) und UBE2G2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf UBE2G2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: UBE2G2: sc-393780
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
UBE2G2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404851-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
UBE2G2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404851-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UBE2G2 kodiert ein E2-Ubiquitin-konjugierendes Enzym, das mit E3-Ligasen zusammenarbeitet, um Ubiquitin-Ketten aufzubauen und den proteasomenabhängigen Proteinumsatz zu regulieren. Es ist ein zentraler Bestandteil der endoplasmatischen-Reticulum-assoziierten Degradation (ERAD), unterstützt die Beseitigung fehlgefalteter oder überschüssiger Proteine und trägt dazu bei, die Proteostase unter zellulärem Stress aufrechtzuerhalten. Über die ubiquitinierungsabhängige Kontrolle der Substratstabilität beeinflusst UBE2G2 Signalwege, die mit der Unfolded-Protein-Response, der Zellzyklusregulation und der Signalstärke zusammenhängen. Eine fehlregulierte Aktivität des Ubiquitin-Proteasom-Systems und der ERAD wurde mit Krebsbiologie, Neurodegeneration und Störungen der Immun-Signalübertragung in Verbindung gebracht, wodurch UBE2G2 einen geeigneten Ansatzpunkt für mechanistische Untersuchungen der Proteinkontrolle darstellt.
UBE2G2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des UBE2G2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von UBE2G2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die UBE2G2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit UBE2G2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.