UBE2E3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423576

Panoramica

Ube2e3 codifica l’enzima murino di coniugazione dell’ubiquitina UBE2E3, un componente E2 del sistema ubiquitina–proteasoma che trasferisce l’ubiquitina dagli enzimi E1 alle ligasi E3 per regolare il turnover proteico e la segnalazione cellulare. Attraverso l’ubiquitinazione, UBE2E3 contribuisce alla proteostasi, alle risposte allo stress e al controllo di vie associate al ciclo cellulare e al danno al DNA, modulando la stabilità dei substrati e i programmi trascrizionali a valle. In quanto modulatore del controllo di qualità proteico e della segnalazione regolatoria mediata dall’ubiquitina, un’alterazione dell’attività di UBE2E3 può influenzare l’omeostasi cellulare in contesti rilevanti per la neurobiologia, l’infiammazione e fenotipi associati al cancro. Lo studio delle reti di ubiquitinazione dipendenti da UBE2E3 aiuta a definire come gli enzimi E2 regolino la dinamica delle vie e la specificità per i substrati nei diversi tessuti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UBE2E3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ube2e3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ube2e3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ube2e3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UBE2E3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ube2e3 per lo studio della segnalazione di UBE2E3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ube2e3 critici per la funzione di UBE2E3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ube2e3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal UBE2E3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UBE2E3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ube2e3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal UBE2E3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UBE2E3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ube2e3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ube2e3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.