UBC12 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423575

Übersicht

Ube2m kodiert UBC12, ein E2-konjugierendes Enzym, das NEDD8 auf Cullin-Gerüstproteine überträgt und dadurch die Aktivierung von Cullin–RING-Ubiquitin-Ligasen (CRLs) sowie eine breit angelegte Kontrolle der Proteostase ermöglicht. Durch die Regulation der CRL-abhängigen Ubiquitinierung beeinflusst UBC12 die Zellzyklusprogression, DNA-Schadensantworten, Signaltransduktion und Stressanpassung, indem es den Abbau zentraler regulatorischer Proteine moduliert. Störungen der Neddylierung können die Proteinhomöostase und die Checkpoint-Kontrolle beeinträchtigen und verbinden die Funktion von Ube2m/UBC12 mit Signalwegen, die häufig in der Krebsbiologie, Neurobiologie und entzündlichen Signalgebung untersucht werden. In Mausmodellen unterstützen Loss-of-Function-Studien zu Ube2m die mechanistische Aufklärung von Netzwerken ubiquitinähnlicher Modifikationen und deren Beitrag zur Gewebeentwicklung sowie zu krankheitsrelevanten Phänotypen.

Das UBC12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Ube2m-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Ube2m-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Ube2m nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die UBC12-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Ube2m-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der UBC12-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Ube2m-Exone abzielen, die für die UBC12-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Ube2m-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom UBC12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom UBC12 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Ube2m-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das UBC12 HDR-Plasmid (m) und UBC12 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Ube2m-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Ube2m-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.