Tyrosine Hydroxylase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400273

Panoramica

TH codifica la tirosina idrossilasi, l’enzima limitante la velocità nella biosintesi delle catecolamine che catalizza la conversione della L-tirosina in L-DOPA, precursore di dopamina, noradrenalina e adrenalina. La sua attività integra la disponibilità del cofattore tetraidrobiopterina (BH4), la catalisi ferro-dipendente e una regolazione mediata dalla fosforilazione per controllare la produzione di neurotrasmettitori nei neuroni dopaminergici e noradrenergici, nonché nelle cellule cromaffini della midollare surrenale. La tirosina idrossilasi è centrale per la differenziazione neuronale, il caricamento vescicolare dei neurotrasmettitori, la segnalazione sinaptica e le risposte cellulari allo stress legate all’equilibrio redox e alla funzione mitocondriale. La disregolazione dell’espressione o dell’attività di TH è ampiamente studiata nel contesto della carenza di dopamina, dei difetti della segnalazione catecolaminergica e delle disfunzioni dei circuiti associate alla neurodegenerazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Tyrosine Hydroxylase (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TH in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TH insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TH a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Tyrosine Hydroxylase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TH per lo studio della segnalazione di Tyrosine Hydroxylase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TH critici per la funzione di Tyrosine Hydroxylase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TH per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Tyrosine Hydroxylase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Tyrosine Hydroxylase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TH. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Tyrosine Hydroxylase Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Tyrosine Hydroxylase (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TH per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TH definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.