TWEAK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423449

Übersicht

Mouse *Tnfsf12* kodiert TWEAK (TNF-like weak inducer of apoptosis), ein Typ‑II-transmembranöses Zytokin aus der TNF-Superfamilie, das auch als löslicher Ligand freigesetzt werden kann und vorwiegend über den FN14/Tnfrsf12a‑Rezeptor signalisiert. Die Bindung von TWEAK an FN14 reguliert entzündliche Genprogramme und den Gewebeumbau, indem sie kanonische und nicht-kanonische NF‑κB‑Signalwege aktiviert und die MAPK-Signalübertragung moduliert; dadurch werden Zellüberleben, Apoptose, Proliferation, Migration und angiogene Antworten beeinflusst. Bei der Maus ist diese Achse an Interaktionen zwischen Immunzellen und Stromazellen sowie an Verletzungsreaktionen beteiligt und wird häufig im Kontext chronischer Entzündung, Fibrose, Neuroinflammation und der Umgestaltung des Tumormikromilieus untersucht. Da TWEAK Zytokinsignale mit Reparaturprozessen verknüpft, stellt es einen nützlichen Knotenpunkt dar, um das Zusammenspiel zwischen inflammatorischen Mediatoren und der Dynamik der extrazellulären Matrix zu analysieren.

Das TWEAK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Tnfsf12-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Tnfsf12-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Tnfsf12 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TWEAK-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Tnfsf12-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TWEAK-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Tnfsf12-Exone abzielen, die für die TWEAK-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Tnfsf12-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TWEAK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom TWEAK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Tnfsf12-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TWEAK HDR-Plasmid (m) und TWEAK HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Tnfsf12-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Tnfsf12-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.