Plasmide CRISPR/Cas9 KO TSHR (m): sc-423527

Présentation

Tshr code le récepteur de la thyréostimuline (TSHR), un GPCR des hormones glycoprotéiques principalement exprimé dans les cellules folliculaires thyroïdiennes, qui transmet les signaux de la TSH via la voie Gs/adénylate cyclase afin d’augmenter l’AMPc et d’activer des programmes transcriptionnels dépendants de la PKA. Cet axe de signalisation régule la biosynthèse des hormones thyroïdiennes, la captation d’iodure, le traitement de la thyroglobuline, ainsi que la croissance et la différenciation des cellules folliculaires. L’activité de TSHR interfère avec les voies MAPK et PI3K pour coordonner des réponses prolifératives et métaboliques en aval des signaux endocriniens. Une dérégulation de la signalisation de Tshr est impliquée dans les maladies thyroïdiennes auto-immunes et les anomalies fonctionnelles de la thyroïde, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier la signalisation des GPCR, l’homéostasie endocrine et les perturbations du récepteur médiées par l’immunité dans des modèles murins.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO TSHR (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Tshr dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Tshr, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Tshr à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine TSHR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Tshr pour l'étude de la signalisation de TSHR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Tshr essentiels à la fonction de TSHR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Tshr pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le TSHR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le TSHR plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Tshr. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le TSHR plasmide HDR (m) et le TSHR (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Tshr pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Tshr définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.