Partículas Lentivirales de Activación (h) tsg 101: sc-400290-LAC

TSG101 (gen de susceptibilidad tumoral 101) codifica tsg101, un componente central de ESCRT-I que reconoce carga ubiquitinada y coordina la clasificación endosomal, la biogénesis de cuerpos multivesiculares y la degradación lisosomal. Mediante la remodelación de membranas dependiente de ESCRT, TSG101 también favorece la escisión final durante la citocinesis y contribuye a la reparación de la membrana plasmática y al tráfico relacionado con la autofagia. Estas actividades se entrecruzan con vías de disminución de receptores, terminación de señales y proteostasis que influyen en el crecimiento celular y las respuestas al estrés. La expresión desregulada de TSG101 o la función de ESCRT se estudian con frecuencia en biología del cáncer y en interacciones hospedador–patógeno, donde se alteran la gemación de membranas y el tráfico vesicular.

Las partículas de activación lentiviral tsg 101 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de TSG101 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral tsg 101 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción TSG101, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de tsg 101. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo TSG101 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.