TS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423565

Panoramica

Tyms codifica la timidilato sintasi (TS), un enzima chiave dipendente dai folati che catalizza la conversione di dUMP in dTMP, mantenendo i pool di nucleotidi della timidina necessari per la replicazione e la riparazione del DNA. L’attività della TS collega il metabolismo a un carbonio alla progressione della fase S, alla stabilità del genoma e alla sintesi del DNA mitocondriale e nucleare attraverso la rete della biosintesi de novo delle pirimidine. Nei sistemi murini, la regolazione di Tyms e l’abbondanza di TS sono comunemente studiate in tessuti proliferativi e in modelli cellulari a rapida divisione, in cui uno squilibrio dei nucleotidi può innescare stress replicativo e segnalazione di danno al DNA. Un flusso metabolico deregolato associato alla TS è rilevante per i meccanismi di alterato controllo del ciclo cellulare e di instabilità genomica, frequentemente indagati nella biologia del cancro e nella ricerca sulla via dei folati.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TS (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tyms in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tyms insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tyms a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TS.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tyms per lo studio della segnalazione di TS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tyms critici per la funzione di TS
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tyms per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tyms. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TS Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TS (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tyms per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tyms definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.